Появление и нарастание титра противооспенных антител в крови у больных и выздоравливающих определяются серологическими реакциями с использованием специфического антигена, приготовляемого чаще всего из вируса вакцины, выращиваемого в развивающихся куриных эмбрионах.
Диагностическое значение имеют появление антител в крови у больных, которые не были вакцинированы в предшествующие два года, или четырехкратный и более прирост антител, обнаруживаемый при повторном взятии крови и одновременном исследовании полученных сывороток. Последнее позволяет сделать более обоснованное заключение о природе диагностируемого заболевания. У больных оспой натуральной антитела появляются в количестве, обнаруживаемом серологическими реакциями на 3—6-й день болезни, достигают максимального титра на 2—3-й неделе и затем постепенно снижаются.
Для серологических исследований обычно применяют задержку гемагглютинации как наиболее простую по технике выполнения и вместе с тем достаточно точную реакцию. Антиген приготовляют из хорио-аллантоисных оболочек 11—13-дневных оплодотворенных куриных яиц, предварительно зараженных вирусом вакцины в разведении 1 : 100. Если используется дермовакцина, то она предварительно обрабатывается антибиотиками для освобождения от бактериальной микрофлоры. После инкубации зараженных яиц (три дня при 1° 37°) оболочки извлекают, тщательно растирают в ступке и разводят физиологическим раствором.
Используют растертые оболочки в виде 20% суспензии (по весу), предварительно отцентрифугироваиной при 1500 оборотах в течение 15 мин.
Антигеном является надосадочная жидкость, которую сохраняют до 3 месяцев и более длительное время в гиороженном состоянии.
Для гемагглютинации используют эритроциты кур, последние заранее отбирают по чувствительности к вирусу вакцины. Минимально допустимая чувствительность эритроцитов к вирусу вакцины составляет разведение 1 : 32 исходного (20%) вирусного антигена. Для реакции используют от двух до четырех гемагглютинирующих единиц. Под гемагглютинирующей единицей понимают минимальное количество антигена в объеме 0,25 мл, вызывающее отчетливо видимую агглютинацию эритроцитов.
Подлежащие исследованию сыворотки предварительно инактивируются 30 мин. при 1° 60° в разведении 1:5 (физиологическим раствором). В реакции используют две контрольные сыворотки: иммунная кроличья, содержащая антитела к вирусу вакцины (положительный контроль), и нормальная кроличья сыворотка без антител (отрицательный контроль).
Испытуемую сыворотку разводят с коэффициентом 2 от 1 : 5 до 1 : 2560. Вначале соединяют антиген с сыворотками и выдерживают в течение одного часа в термостате (1° 35—37°) и 14 часов при 1° 4°. К этой смеси добавляют 0,5 % суспензии отмытых куриных эритроцитов и оставляют на один час при комнатной температуре. Титр испытуемых сывороток определяется как наивысшее разведение, дающее полную задержку агглютинации эритроцитов.
Кроме задержки гемагглютинации, применяют реакцию связывания комплемента в обычной прописи; для выдерживания комплемента используют антиген, приготовляемый из хорио-аллантоисных оболочек развивающихся куриных эмбрионов, зараженных вирусом вакцины.