Метаболиты актиномицетов

Метод ТСХ применяли для выделения, очистки и идентификации различных продуктов метаболизма актиномицетов. Бек и др. приводят величины Rf для нонактина и некоторых его гомологов, полученные на силикагеле G со смесью хлороформ—этилацетат (1:2): нонактин 0,62, монактин 0,48, динактин 0,32 и тринактин 0,15. Бикель и др. установили значения Rf акумицина и ряда стандартных антибиотиков в трех различных растворителях на силикагеле G (табл. 1.1).

Таблица 1.1

Величины Rf X 100 акумицина и стандартных антибиотиков группы макролидов, полученные на силикагеле G

Обнаружение пятен они проводили обработкой серной кислотой или методом биоавтографии. С этой целью на поверхность заряженного бактериями слоя агарового студня помещали слои фильтровальной бумаги, после чего к бумаге прижимали в течение примерно 20 мин пластинку размером 20X20 см с усилием около 2 кг. Слой агара инкубировали от 16 до 18 ч при 37 °С.

Кассани и др. описали хроматографический анализ актиномицина на силикагеле и оксиде алюминия. Отделить группу С от группы F можно на силикагеле с помощью ряда различных растворителей, среди которых лучшим оказалась смесь бутанол—уксусная кислота—вода (10 : 1 : 3); в этой смеси Rf для группы F равна 0,5, а для группы С — 0,7 при длине пути разделения 15 см. Отдельные соединения можно выделить на оксиде алюминия, проводя элюирование нижним слоем смеси растворителей этилацетат—симм-тетрахлорэтан—вода (3:1:3); при этом (длина пути разделения 12,5 см) получены следующие величины Rf : d — 0,44; С2 — 0,51; С3 — 0,58;" Fi — 0,21 и F2 — 0,35; эти соединения легко обнаружить по ярко-оранжевой окраске при наблюдении в УФ-свете.

Кондо и др. провели разделение водорастворимых основных антибиотиков, продуцируемых стрептомицинами на активном угле, используя четыре типа пластинок из нейтрального и подкисленного активного угля с гипсом в качестве связующего и без него. Лучшие результаты получены на подкисленном угле. Для незакрепленных слоев суспензию готовили, смешивая 10 г активного угля, 30 мл 0,5 н. соляной кислоты и 30 мл метанола. Для слоев, содержащих гипс в качестве связующего, добавляли 0,5 г гипса и серную кислоту заменяли на соляную. Исследовали шесть смесей; лучшие результаты получены для смеси метанол—0,5 н. кислота (1:4) с добавкой соляной или серной кислот в зависимости от того, какую из кислот использовали при приготовлении золя для тонкослойного покрытия. Таким методом антибиотики были разделены на 4 группы: стрептомицин, стрептотрицин, фрадиомицин и канамицин. Насбаумер и Шордере использовали тонкие слои силикагеля со смесями н-бутанол—вода—метанол (40 : 20 : 10) + n-толуолсульфокислота для идентификации стрептомицина и дигидрострептомицина.

Катаяма и Икеда разработали методику двумерного разделения стрептомицинов, сочетающую ТСХ на силикагеле и последующий электрофорез. Полного разделения всех компонентов удалось достичь методом ТСХ в четыре этапа, используя 1) насыщенный водой бутанол, содержащий по 2% п-толуол сульфокислоты и пиперидина (растворитель Si), с последующим электрофорезом в 1 %-ном тетраборате натрия; 2) ТСХ с 3 %-ным ацетатом натрия (растворитель S2) с последующим электрофорезом в 1 %-ном тетраборате натрия; 3) ТСХ с S2 с последующим электрофорезом в буфере Михаэлиса—Веронала, рН 8,0, и 4) ТСХ с S2 с последующим электрофорезом в 0,04 М буферном растворе формиата аммония, рН 3. Соединения обнаруживали реактивом Т-239.

Стрептомицин, дигидродезоксистрептомищин. и дигидростреп-томицин делили на силикагеле, элюируя 3 %- или 4 %-ным ацетатом натрия . Стрептомицин и другие туберкулостатиче-ские антибиотики (канамицин, виомицин, циклозерин, рифами-цин SV и капреомицин) разделяли вначале смесью ацетон— 2 %-ный ацетат натрия (9:1), а затем смесью н-бутанол—пиридин—метанол—уксусная кислота—вода (30 : 20: 20 : 1 :30) на силикагеле G.